Mikrobna kontaminacija
Kontaminacija je jedan od najčešćih i najozbiljnijih problema u kulturi ćelija, koji kompromituje rezultate istraživanja i uzalud troši dragoceno vreme i resurse. Kontaminanti mogu biti mikrobni - kao što su bakterije, gljive, mikoplazma i nanobakterije - ili nemikrobni, uključujući hemijske nečistoće ili unakrsnu kontaminaciju drugim ćelijskim linijama. Među njima, mikrobna kontaminacija je najrasprostranjenija, pri čemu su bakterije, mikoplazma i nanobakterije vodeći uzročnici.Kao pouzdan dobavljač alata za bionauke, abm donosi obimno znanje i stručnost u detekciji i kontroli kontaminacije bakterijama, mikoplazmom i nanobakterijama. Možemo biti vaš pouzdan partner u očuvanju vaših projekata ćelijskih kultura čistim i pod kontrolom, čak i ako je kultura već ugrožena.
Kontrola mikoplazme
Kontaminacija mikoplazmom: Ključni problem u kulturi ćelija
Kontaminacija mikoplazmom predstavlja značajan problem u kulturi ćelija zbog njene sposobnosti da promeni ponašanje ćelija, utiče na eksperimentalne rezultate i ostane neprimećena tokom rutinskog mikroskopskog pregleda. S obzirom na široku rasprostranjenost mikoplazme, pravilna detekcija i kontrola su od suštinskog značaja za očuvanje integriteta vašeg rada sa kulturama ćelija.Zašto je kontrola kontaminacije mikoplazmom kritična:
• Uticaj na rast ćelija: Mikoplazma može inhibirati ili poremetiti rast ćelija, što dovodi do nekonzistentnih ili nepouzdanih rezultata.
• Promene u fiziologiji ćelija: Kontaminirane ćelije mogu pokazati izmenjenu ekspresiju gena, metabolizam i proizvodnju proteina, što iskrivljuje ishode eksperimenata.
• Obmanjujući eksperimentalni rezultati: Pošto mikoplazma može dugo ostati neotkrivena, eksperimenti mogu dati netačne ili nepouzdane podatke.
Uz abm-ove komercijalno vodeće komplete (kitove) za detekciju mikoplazme i lek MycOut™, možete biti sigurni da će vaš rad sa kulturama ćelija biti ne samo precizno nadgledan, već i efikasno dekontaminiran ukoliko dođe do kontaminacije. Zapravo, naš kit za detekciju mikoplazme rangiran je kao br. 1 u studiji koju je sproveo dr B.W. Johnson u vodećoj laboratoriji USDA (Ministarstvo poljoprivrede SAD), objavljenoj u časopisu J Virol Methods (februar 2020; 276:113769). Do danas su naši popularni kitovi za detekciju mikoplazme citirani u preko 1.100 publikacija u različitim istraživačkim projektima. Pored toga, sprovedena je analiza konkurencije sa našim novim, poboljšanim kitom za detekciju mikoplazme (Mycoplasma Pro PCR Detection Kit, kat. br. G239) i on je nadmašio vodeće brendove u ovoj industrijskoj grani.
Detekcija mikoplazme
abm-ovi kompleti za detekciju mikoplazme nude brzi, osetljivi i pouzdani skrining za zaštitu vaših ćelijskih kultura. Kompleti Mycoplasma PCR i Pro PCR Detection detektuju preko 200, odnosno 300 sojeva, pri čemu Pro verzija poseduje internu kontrolu za dodatnu tačnost. Za ultra-visoku osetljivost, Mycoplasma qPCR Detection Kit detektuje svega 10 kopija direktno iz medijuma. Sva tri kompleta nadmašuju konkurente u pogledu osetljivosti, brzine i vrednosti.
Osetljiva detekcija
abm-ov Mycoplasma PCR Detection Kit može detektovati uzorke koji sadrže svega 10 genomskih kopija mikoplazme. abm-ov Mycoplasma PCR Detection Kit (kat. br. G238) korišćen je za detekciju uzoraka koji sadrže od oko 10 do 100.000 genomskih kopija mikoplazme. Prisustvo mikoplazme je potvrđeno u vidu trake (benda) od 450 bp.
Pouzdani rezultati
Mycoplasma Pro PCR Detection Kit (kat. br. G239) korišćen je za potvrdu prisustva kontaminacije u pet uzoraka ćelijske kulture. Pozitivne trake mikoplazme (300 bp – 600 bp) detektovane su u uzorcima 2, 3 i 4. Traka interne PCR kontrole (180 bp) prisutna je u svim kolonama (trakama gela), što sa sigurnošću potvrđuje istinski negativan rezultat.
Pouzdana amplifikacija
Mycoplasma qPCR Detection Kit (kat. br. G240) pokazuje visoko linearnu qPCR standardnu krivu iz desetostrukog serijskog razblaženja DNK pozitivne kontrole (od 10⁷ do 1 kopije). qPCR amplifikacija je izvedena kroz osam tačaka razblaženja, a dobijene Ct vrednosti pokazale su snažnu linearnu korelaciju sa log₁₀(broj kopija), što ukazuje na odličnu efikasnost amplifikacije i širok dinamički opseg. Nije uočena amplifikacija u kontroli bez šablona (NTC), što potvrđuje visoku specifičnost eseja.
Eliminacija mikoplazme
Kontaminacija mikoplazmom predstavlja stalni izazov u laboratorijama za ćelijsku kulturu širom sveta. abm nastavlja da vodi na ovom polju, kako u detekciji, tako i u eliminaciji ovih kontaminanata. Oslanjajući se na uspeh našeg MycoAway™ 1000X Mycoplasma koktela, razvili smo MycOut™, rešenje druge generacije koje sadrži dve nezavisne komponente leka. MycOut™ efikasno eliminiše preko 100 vrsta mikoplazme, uključujući i one koje su rezistentne na tretmane prve generacije.
Kontrola nanobakterija
Nanobakterije su ultra-mali, submikroskopski entiteti za koje je predloženo da predstavljaju novu vrstu mikroorganizama. Iako su njihova klasifikacija i postojanje izazvali debatu u naučnoj zajednici, nedavna istraživanja iz naše laboratorije snažno podržavaju hipotezu da su nanobakterije zaista poseban oblik mikroorganizama. Naši nalazi pokazuju da se nanobakterije ne samo replikuju i rastu u okruženjima ćelijskih kultura, već se mogu efikasno kontrolisati pomoću našeg NanOut™ agensa.Uprkos tome što su nedovoljno priznate u široj naučnoj zajednici, činjenica je da je kontaminacija nanobakterijama prisutna u praktično svakoj ćelijskoj liniji. Ključna razlika je u tome što su neke ćelijske linije pogodnije za rast nanobakterija od drugih. Ovi kontaminanti imaju tendenciju da proliferišu posebno kada ćelije prolaze kroz određene stresove, kao što su odmrzavanje iz tečnog azota, virusna infekcija ili izloženost specifičnim hemijskim tretmanima ili lekovima.
Kontrola bakterija
Pošto se većina bakterija brzo replikuje - često u roku od 20 minuta - bakterijsku kontaminaciju u kulturama ćelija je lako uočiti jer medijum brzo postaje zamućen. U takvim slučajevima, najbolja laboratorijska praksa preporučuje odbacivanje kontaminirane kulture i ponovno pokretanje procesa sa novom bočicom.Međutim, ovaj pristup može biti poguban kada rezervna bočica nije dostupna, kao što je slučaj pri radu sa novoformiranim ćelijskim linijama, stabilnim ćelijskim linijama u ranoj fazi ili veoma vrednim proizvodnim ćelijskim linijama.Za ove kritične situacije, naše BacOut™ rešenje nudi pouzdanu metodu za spasavanje vaših dragocenih ćelija od bakterijske kontaminacije. Iako je proces tehnički zahtevan, uspeh je dostižan striktnim praćenjem našeg protokola.